Nacida en Santa Ana, Orange County, California. Hija de Dick y Donna Pfeiffer, tiene tres hermanos; un hermano mayor y dos hermanas menores. Tiene ascendencia neerlandesa, alemana, irlandesa, sueca y suiza.

En 1981 se casó con el actor Peter Horton, pero más tarde se divorciaron. En 1993, Pfeiffer adoptó a una niña, Claudia Rose Pfeiffer, más tarde ese año se casó con el productor David E. Kelley, creador de las series para televisión "Chicago Hope" y "Ally McBeal", juntos tuvieron un hijo en 1994, que se llama John Henry.

Su primer papel protagonista fue el de Stephanie Zinone en el musical de 1982 Grease 2 de Patricia Birch, el cual difícilmente podría haber predecido su ilustre carrera con fantásticas actuaciones en películas como Casada con todos de Jonathan Demme, Batman vuelve de Tim Burton y Lo que la verdad esconde de Robert Zemeckis, entre otras. Su trabajo más reciente es la comedia romántica I Could Never Be Your Woman de Amy Heckerling, donde interpreta el...